5.5 检测限与定量限

　　精密吸取“3.1”项下对照品溶液，加甲醇逐级稀释，进样，记录色谱图，在信噪比(S/N)为3：1时测得检测限为8ng，在信噪比(S/N)为10：1时测得的定量限为36ng。

6 样品含量测定

　　按“3”项下的方法分别制备对照品溶液和供试品溶液，各取20?L进样，按外标法以峰面积计算样品含量，结果表明，3批样品含量均在99.0%以上(见表1)。

7 有关物质测定

　　取BL供试品约20mg，精密称定，置25mL棕色量瓶中，加甲醇适量，超声助溶，冷却至室温，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得0.80mg/mL的溶液作为供试品溶液。精密移取此溶液适量，用甲醇稀释100倍，得自身对照溶液。以不加校正因子主成分自身对照法计算有关物质的含量[7]。结果表明，有关物质均在1%以内(见表1)。

8 讨论

　　8.1 波长的选择

　　取BL对照品溶液进行紫外扫描显示其最大吸收波长在228nm和317nm处，其中228nm处的吸收值最高，因此选择228nm用于BL的含量测定，保证测定时有较高的灵敏度。

　　8.2 柱温的选择

　　考察了25℃、30℃、40℃的不同柱温下对样品分离效果的影响，实验表明，采用40℃的柱温，可减小流动相粘度、降低柱压、缩短出峰时间并改善分离效果，故将柱温定为40℃。

　　8.3 流动相的选择

　　根据BL的化学性质，考虑采用酸性流动相可以获得较好效果。经过实验比较采用甲醇-乙酸-水系统作为流动相，并且变换流动相比例和乙酸浓度，最终确定流动相为甲醇-0.1%乙酸(42：58，V/V)，此条件下分离效果最好，保留时间适中。

　　8.4 稳定性考察

　　由于BL的结构特性，通常在溶液中不稳定，且见光易分解[8-9]，考察了BL溶液在透明量瓶和棕色量瓶中的稳定性，发现BL溶液在透明量瓶放置8小时后含量显著降低，而在棕色量瓶中的放置12小时含量变化不大，RSD小于2.0%，但是随着时间增长含量仍会缓慢降低。故在试验过程中需采取避光措施，并于配制后尽快使用。

　　8.5 结论

　　综上所述，本方法操作简便且检测限、定量限、精密度、重复性等均符合要求，故本法适用于对BL含量及其有关物质进行测定，对于BL的质量控制和使用安全有着十分重要的意义。

参 考 文 献

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　　[7] ChP(中国药典).2010.VolⅡ(二部)：Appendix (附录)V D

　　[8] 夏明，董晓烨.当归养血丸中阿魏酸的含量测定[J].医药导报，2010，29(1)：103-104.

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