由于我的实习时间只有三个星期，故在刘老师的安排下对SRB做些认知性的实习，以下为我的主要实习内容

　　大致了解实验室自XX年开始启动的SRB抑制课题的一些工艺原理流程

　　硫酸盐还原菌(SRB)是导致大庆油田地面系统产生硫化物从而造成设备腐蚀、滤料污染等危害的根源;实验室立足于微生物生态抑制，改变以往追求杀灭SRB数量的目的，转而以抑制SRB活性为目的,是大庆油田系统控制SRB危害的新方法，可降低生产运行成本

　　本研究采用的折流板反应器有7个单元格，每个单元格长*宽*高=9.5cm*12cm*42cm,有效体积4.4L,单元格内装1/3高度的活性污泥.反应器上部为排气孔，排气孔的导气管伸到水封瓶液面以下，保持整个系统厌氧状态.

　　水箱中的水通过泵泵入反应器，以推流形式流过各单元格，并从反应器流出。

　　反应器的启动与运行

　　将含有大量的硫酸盐还原菌的厌氧污泥，接种到反应器中;

　　现阶段，反应器进水为配制的模拟水，在自来水中加入碳源(白糖)、硫酸钠、少量复合肥，用碳酸氢钠调节碱度;浓度：COD=1800mg/L,SO42-=600mg/L左右;进水流量46L/d, 每个单元格水力停留时间(HRT)=2.3hr

　　一、微生物镜下观察

　　G氏染色

　　步骤为：涂片→固定→结晶紫色染色→水洗→碘液媒染→水洗→酒精脱色→番红复染→水洗→干燥→观察。

　　涂片 与单染色法相同。

　　固定 与单染色法相同。

　　结晶紫染色 染色1分钟，然后水洗并用吸水纸吸干。

　　碘液媒染 染色1分钟，然后水洗并吸干。

　　酒精脱色 用95%酒精脱色，直到酒精不出现紫色时即停止(大约半分钟)，然后立即水洗，并吸干。

　　番红复染 染色3分钟左右，然后水洗并吸干。

　　镜检 在显微镜油镜头下观察，菌体显蓝紫色的为革兰氏阳性菌;菌体显红色的为革兰氏阴性菌。

　　SRB为革兰氏阴性菌(具体操作中由于番红变质几次实验结果均不理想)

　　二、厌氧型为生物的培养(SRB和DNB的富集)

　　1.SRB菌

　　采用

　　Hungate厌氧操作技术、绝迹稀释法(MPN)以及“滚管”培养对样本进行分离，多次纯化获得纯菌株SRB。

　　具体方法：向改良后Starkey培养基(K2HPO4 0.5g，NH4CI 1.0g ，Na2SO4 10g ，CaCI22H2O 0.1g ，MgSO47H2O 2.0g，酵母膏 6.0g ，60%的乳酸钠溶液 6ml，蒸馏水1000 ml，pH=7.8)中加入0.2%的刃天青溶液，培养基煮沸后，加入L-半光盐酸盐0.5g，通入高纯氮气驱氧30min，121℃灭菌20min，固体培养基加入16%的琼脂糖。

　　单独配 3%的FeSO4(NH4)2 SO4 厌氧

　　SRB菌株于液体培养基中37℃培养48h 后, 在Olympus COVER-018光学显微镜下革兰氏染色观察。

　　2.DNB菌

　　方法同SRB菌，PH值最好在7，

　　药品：

　　(NH4 ) 2SO4 3 g, KCl 0.1 g, K2HPO4 0.5 g, M gSO47H2O 0.5g,

　　Ca (NO3 )2 0.01 g, FeSO47H2O 8.0 g, 蒸馏水1 000 mL

　　121℃灭菌15 m in。

　　恒温摇床培养箱振荡培养

　　由于此项操作开始时间较晚，至实习结束，菌落还未完成一个完整周期的培养。

　　三、水生细菌的计数

　　1.血球板计数法

　　取样：先清洗一个容量为100毫升的取样瓶或烧杯。取样前轻轻振荡试管搅拌，待分布均匀后，立即用注射器针管(无菌)取样，取样的量为1毫升。加蒸馏水100倍稀释。

　　样品放于计数板：放置前必须将血球计数板和盖玻片清洗干净、擦干，不能有油污染和杂质。将血球计数板平放在桌子上，盖好盖玻片;然后把样品瓶轻轻摇动几下，菌分布均匀，并立即用干净的微吸管取样品，迅速把微细吸管放到盖玻片的边缘处，轻压微细吸管的橡皮帽，使样品流入计数板内。注意控制样品流入量，不能过多，过多则流入到沟内;也不能过少，过少则计数时不准确(计数后的数量一般偏少)，应充满画线方格及其周边部分。还应注意盖玻片下不能有气泡存在，否则会造成计数不准确。样品吸入血球计数板后，稍停1分钟，待细菌沉降在玻片表面上再在显微镜下进行计数。

　　计数：计数中央大格的4个角的中格，每个中格有25个小格，逐一计数，4个中格相加共计数100个小格。计数时应从计数框一角开始，在计数框边缘的标本应按"计上不计下、计左不计右"的原则，计数出细菌的总量后，按下式计算出每毫升菌液中的细菌数量：细菌数量=100个小格的细菌数×4×10000×稀释倍数。