香蕉及土壤中吡唑醚菌酯和戊唑醇残留的高效液相色谱分析

香蕉含纤维、钾、维生素B6 和抗氧化物等营养价值。香蕉的叶斑
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香蕉含纤维、钾、维生素B6 和抗氧化物等营养价值。香蕉的叶斑病、黑星病对香蕉产量有重大影响。吡唑醚菌酯和戊唑醇复配农药对此类病害有较好的防治效果。目前,检测吡唑醚菌酯和戊唑醇的方法有气相色谱法、液相色谱法、气相色谱———串联质谱法和液相色谱———串联质谱法。关于在液相色谱上同时检测2 种农药在香蕉和土壤中残留量的报告尚少。本文对香蕉及土壤中吡唑醚菌酯和戊唑醇测定方法进行了研究,以期为我国香蕉等农产品中吡唑醚菌酯和戊唑醇残留量检测提供技术参考。

1 材料与方法

1.1 药剂及试剂

吡唑醚菌酯(纯度99.0%)和戊唑醇(纯度98.5%)购自Dr.Ehrenstorfer GmbH;乙腈(色谱纯)。

1.2 主要仪器设备

Waters 高效液相色谱仪(2489 紫外检测器)及SunfireTMC18(4.6mm×150mm,5um)。

1.3 分析方法

1.3.1 样品提取及净化提取:称样20g,加40.0mL 乙腈,香蕉匀浆2min 后过滤到装有7g NaCl 的具塞量筒中;土壤振荡30min,加7g NaCl。振荡2min,静置20min,取上清液20.0mL至圆底烧瓶中,蒸干,加入5.0mL 正己烷溶解混匀,待净化。

净化:用5.0mL 正己烷活化CNW/NH2固相萃取柱后,倒入待净化溶液,弃去,用5.0mL 正己烷淋洗NH2 小柱,重复二次,淋洗液弃去。再用5.0ml 正己烷—丙酮(体积比8∶2)洗脱,重复二次,收集洗脱液。蒸干,用5.0mL 甲醇定容后,待测。

1.3.2 仪器检测条件紫外检测波长分别是220nm、278nm;流动相A 为色谱纯乙腈,流动相B 为优级纯纯水;柱温:35℃;进样体积:10 样体;A:B 为60:40;流速1.0mL/ min,保持15min。在此条件下,吡唑醚菌酯和戊唑醇的保留时间分别约为5.2min、9.3min。

2 结果与讨论

2.1 标准曲线

分别准确称取吡唑醚菌酯和戊唑醇标准品,用甲醇稀释,吡唑醚菌酯配制成0.01ug/ml、0.025ug/ml、0.05ug/ml、0.1ug/ml、0.5ug/ml 的系列混合标准工作溶液,戊唑醇配制成0.02ug/ml、0.05ug/ml、0.1ug/ml、0.5、1ug/ml 的系列混合标准工作溶液,按文中1.3.2 中条件进行测定,以进样浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标绘制标准曲线。吡唑醚菌酯和戊唑醇的标准曲线图分别见图1、图2。

吡唑醚菌酯和戊唑醇的标准曲线方程分别为y=38756x+121.26(R2=0.9999)和y=25193x+460.85(R2=0.9964),表明0.01~0.5ug/mL 和0.02~1ug/mL 进样浓度与相应峰面积之间的线性关系良好。

2.2 准确度、精密度和灵敏度

取制备好的空白对照样品,加入一定量的吡唑醚菌酯和戊唑醇标准溶液,按文中1.3.1 中方法进行提取,按1.3.2 中条件测定回收率及相对标准偏差。吡唑醚菌酯在香蕉与土壤中的添加水平为0.01~0.2mg/kg;戊唑醇在香蕉与土壤中的添加水平为0.025~0.5mg/kg。每个浓度重复5 次。吡唑醚菌酯和戊唑醇在香蕉全焦、香蕉焦肉及土壤上的添加回收图,见图3~图6。

吡唑醚菌酯和戊唑醇在香蕉和土壤上的添加回收色谱图,见图1~ 图6。添加回收率试验结果(见表1)表明:当吡唑醚菌酯的添加水平在空白香蕉、焦肉、土壤样品中为0.01~0.2mg/kg 时,其平均回收率为90%~102%,相对标准偏差为0.9%~6.9%;当戊唑醇的添加水平在空白香蕉、焦肉、土壤样品中为0.025~0.5mg/kg 时,其平均回收率为82%~102%,相对标准偏差为1.4%~6.6%,符合农药残留分析方法的技术标准要求。通过添加回收试验,确定吡唑醚菌酯和戊唑醇在香蕉和土壤样品中方法的检出限分别为0.01mg/kg、0.025mg/kg;各样品中2 种化合物的最小检出量分别为0.1ng、0.2ng。所建立方法具有较好的精密度和灵敏度。

2.3 淋洗液

吡唑醚菌酯和戊唑醇在香蕉焦肉中分别加标0.2mg/kg、0.5mg/kg 及空白样品的净化色谱图,如图7 所示。由图7 可知,本研究选用CNW/NH2 净化时,上样后,先用10mL 正己烷淋洗去杂质,后分别用正己烷—丙酮(体积比6∶4)和正己烷—丙酮(体积比8∶2)进行洗脱样品。通过实验比较发现,2种洗脱液均可与杂质较好分离;但是选用洗脱液正己烷—丙酮(体积比6∶4)较洗脱液正己烷—丙酮(体积比8∶2)洗脱后的目标物的响应值(峰面积)明显降低,洗脱液正己烷- 丙酮(体积比6∶4)正己烷—丙酮洗脱后吡唑醚菌酯和戊唑醇的回收率分别为35%、31%;而洗脱液正己烷—丙酮(体积比8∶2)洗脱净化后,吡唑醚菌酯和戊唑醇的回收率均能达到90%以上,因此选用正己烷———丙酮(体积比8:2)作为洗脱液。

2.4 色谱柱

经过选择2 种不同的色谱柱进样时比较发现,当色谱柱为XTERR MS C18(4.6mm×250mm,5um)时,吡唑醚菌酯和戊唑醇的保留时间分别约为6.9min、12.1min;当色谱柱为SunfireTM C18(4.6mm×150mm,5um)均能达到的添加回收时,吡唑醚菌酯和戊唑醇的保留时间分别约为5.2min、9.3min。在同一液相色谱仪上,流动相组成、梯度洗脱方法相同,采用不同的色谱柱,可以导致组分的保留时间差异较大。为了节省进样时间,提高样品分析的效率,本方法确定采用SunfireTM C18(4.6mm×150mm,5um)色谱柱进行吡唑醚菌酯和戊唑醇的残留分析。

3 结论

本研究采用Waters 高效液相色谱仪(2489 紫外检测器),经过大量的试验数据验证与查看相关文献,对本研究进行优化对比,建立了一套较为简便的同时检测香蕉和土壤中的吡唑醚菌酯和戊唑醇残留的方法。选用CNW/NH2 净化,净化杂质少、响应高,净化时通过比较发现,洗脱液选用正己烷—丙酮(8+2)回收率比正己烷—丙酮(6+4)回收率效果更好,因此确定选用正己烷—丙酮(8+2)为净化洗脱液;为提高样品分析的速率,通过选择两条长度分别是250mm 和150mm 的色谱柱进行进样比较,试验证明选择SunfireTM C18(4.6mm×150mm,5um)进样吡唑醚菌酯和戊唑醇的保留时间较选择色谱柱为XTERR MS C18(4.6mm×250mm,5um)进样吡唑醚菌酯和戊唑醇的保留时间短,因此,选择SunfireTM C18(4.6mm×150mm,5um)色谱柱进样是一种简便、快捷的同时检测香蕉中吡唑醚菌酯和戊唑醇残留分析仪器的方法;采用外标法,通过UPLC定性定量检测的灵敏度、精密度和回收率等均符合农药残留分析的要求。同时也为其他作物中吡唑醚菌酯和戊唑醇残留分析方法提供了依据。

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作者简介:王素茹,本科学历,助理工程师,研究方向:农药残留分析。

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