突变型nm23-H1 基因的磷酸化的活性研究结果

【摘要】 背景与目的 磷酸化活性是nm23-h1重要的生物学活性,本研究旨在探讨不同位点的突变对nm23-h1磷酸化活性的影响。方法 以野生型nm23-h1研究对照,采用放射自显影的方法检测nm23-h1野生型(wt)和4种突变型(p96s,h118f,s120g和s44a)原核表达蛋白的自身丝氨酸
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【摘要】  背景与目的 磷酸化活性是nm23-h1重要的生物学活性,本研究旨在探讨不同位点的突变对nm23-h1磷酸化活性的影响。方法 以野生型nm23-h1研究对照,采用放射自显影的方法检测nm23-h1野生型(wt)和4种突变型(p96s,h118f,s120g和s44a)原核表达蛋白的自身丝氨酸与自身组氨酸磷酸化活性,应用反相高效液相色谱技术(rp-hplc)检测上述蛋白的ndpk激酶活性。结果 野生型和突变型nm23-h1蛋白的自身丝氨酸与自身组氨酸磷酸化活性由大到小依次为p96s、wt、s44a、s120g和h118f,而ndpk活性由大到小依次为:wt、s120g、p96s、s44a和h118f;经线性相关分析,自身丝氨酸与组氨酸磷酸化活性呈正相关(r =0.983,p <0.01),但ndpk活性与自身丝氨酸和自身组氨酸活性均无相关性(分别为r =0.458,p >0.05;r =0.482,p >0.05)。结论 不同位点的突变对nm23-h1自身丝氨酸、自身组氨酸及ndpk激酶活性影响不同,ndpk活性与自身磷酸化活性并不完全关联。其中118位组氨酸是nm23-h1激酶活性的关键氨基酸;96位脯氨酸可能与nm23-h1的磷酸转移能力有关;而120位丝氨酸可能为自身丝氨酸和组氨酸磷酸化位点;44位丝氨酸可能为另一具有ndpk激酶的氨基酸。

【关键词】 nm23-h1;突变;磷酸化活性

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